溫度的準(zhǔn)確性是指樣品孔溫度與設(shè)定溫度的一致性,它直接關(guān)系到實(shí)驗(yàn)的成敗蓬勃發展。如果排除樣品加入過程中的問題特點,對于PCR反應(yīng)而言zui重要的莫過于溫度控制的準(zhǔn)確性積極回應,由于PCR是一個幾何級數(shù)擴(kuò)增的過程,擴(kuò)增過程中退火溫度的細(xì)微變化會被放大而直接影響結(jié)果又進了一步,不論是變性多種場景、退火還是延伸都需要準(zhǔn)確控制溫度,對退火溫度而言溫控顯的尤為重要規劃,有時1度甚至0.5度的差異也能決定實(shí)驗(yàn)的成功與失敗擴大公共數據,所謂差之毫厘,謬之千里帶動擴大。因而對PCR擴(kuò)增儀而言溫度控制就意味著質(zhì)量核心技術體系。
溫度的均勻性是指樣品孔間的溫度差異,它關(guān)系到在不同樣品孔進(jìn)行反應(yīng)結(jié)果的一致性持續發展。我們在實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)有時用同樣的樣品必然趨勢,同樣的PCR反應(yīng)程序,zui后的結(jié)果竟然差異非常明顯供給,或許就是因?yàn)椴煌恢玫臏囟炔痪恍运隆?/div>
溫度控制除了度的方法,還有一個廠家喜歡大力宣傳的指標(biāo)——升降溫的速度。更快的升降溫速度進行探討,可以縮短反應(yīng)進(jìn)行的時間落到實處,而且縮短了可能的非特異性結(jié)合、反應(yīng)的時間最新,能提高PCR反應(yīng)煌特異性技術創新。因此從本質(zhì)而言溫控方式就從以前相對穩(wěn)定耐用的機(jī)械式轉(zhuǎn)向了升降溫更快速的半導(dǎo)體。除了機(jī)械本身的原因重要作用,影響升降溫速度的還有制作承托樣品管的基座模塊的材料的導(dǎo)熱性持續向好。
現(xiàn)在的羅氏定量PCR儀一般具有兩種溫控模式,即模塊溫控模式(Block-control)和反應(yīng)管溫控模式)(tube-control)充足。在模塊溫控模式下進展情況,機(jī)器根據(jù)探se器直接探se的溫控模塊(即承載樣品的金屬臺)的溫度進(jìn)行控制,這種模式適用于長時間的靜態(tài)孵育(如連接綠色化發展、酶切至關重要、去磷酸化等)。反應(yīng)管溫控模式實(shí)際上是一種模擬試管/PCR板的溫控模式效果,根據(jù)探se器所探測到的溫控模塊的溫度由計(jì)算機(jī)計(jì)算出管內(nèi)/PCR板孔內(nèi)樣品液的溫度來進(jìn)行控制使用。一般說來,試管溫控更為準(zhǔn)確密度增加,因?yàn)楣軆?nèi)樣品的溫度無法與溫控模塊同時達(dá)到預(yù)設(shè)溫度有效性。特別是PCR反應(yīng)中的孵育過程一般都很短暫(30秒或更短),如果采用只有模塊溫控模式的話,反應(yīng)混合物孵育的時間與程序設(shè)定的時間會有相當(dāng)大的差距廣泛關註。而反應(yīng)管控制的算法能自動補(bǔ)償時間善於監督,而且適合各種類型的反應(yīng)管,確保反應(yīng)混俁物按照程序設(shè)定的時間維持預(yù)設(shè)溫度深入實施。
有的羅氏定量PCR儀廠家推出了另一種溫控方式至關重要;熱敏電極溫控模式。該方法將一個熱敏電極插入一個專門的測量管中(管中裝有礦物油)效果,反應(yīng)進(jìn)行時有所應,將該測量管插入溫控模塊的樣品進(jìn)行檢測。他們認(rèn)為通過此途徑可以監(jiān)測反應(yīng)管內(nèi)樣品的實(shí)際溫度合作關系,但這種方法未免有些華而不實(shí)著力提升;(1)測量管中礦物油的溫度變化與實(shí)際反應(yīng)樣品的溫度變化未必一致;(2)因?yàn)闇y量管必須占用一個樣品孔傳遞,所以使用該溫控方式時就無法使用96孔PCR板作實(shí)驗(yàn)融合。