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流式細(xì)胞儀的調(diào)試和使用

更新時(shí)間:2019-08-26瀏覽:2275次

  簡(jiǎn)介
 
  古語(yǔ)說(shuō):“工欲善其事實現,必先利其器”提單產。要想很好地應(yīng)用流式細(xì)胞分析和分選技術(shù),必需先對(duì)儀器進(jìn)行調(diào)試取得明顯成效,使其處于良好的工作狀態(tài)技術創新,并能正確使用儀器醒悟。下面簡(jiǎn)要介紹細(xì)胞計(jì)的調(diào)試項(xiàng)目及要點(diǎn)、使用的程序等等生產體系。
 
  調(diào)試和校準(zhǔn)
 
  流式細(xì)胞儀在使用前新模式,甚至在使用過(guò)程中都要精心進(jìn)行調(diào)試,以保證工作的可靠性高質量。調(diào)試的項(xiàng)目主要是激光強(qiáng)度應用情況、液流速度和測(cè)量區(qū)的光路等。
 
  激光強(qiáng)度:除調(diào)整反射鏡的角度以調(diào)整到所需波長(zhǎng)的激光出光外,還要結(jié)合顯示屏上的光譜曲線(xiàn)使激光的強(qiáng)度輸出為大也逐步提升。
 
  液流速度:可通過(guò)操作臺(tái)數(shù)字顯示監(jiān)督,調(diào)節(jié) 氣體壓力大小以獲得穩(wěn)定的液流速度能力和水平。
 
  測(cè)量區(qū)光路調(diào)節(jié)〗M織了。哼@是調(diào)試工作的關(guān)鍵。需要保證在測(cè)量區(qū)的液流註入了新的力量、激光束解決問題、90散射測(cè)量光電系統(tǒng)垂直正交服務效率,而且交點(diǎn)較小。一般可在用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球等校準(zhǔn)中完成最為突出。
 
  流式細(xì)胞術(shù)中所測(cè)得的量是相對(duì)值逐步改善,因此需要在使用前或使用中對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行校準(zhǔn)或標(biāo)定,這樣才能通過(guò)相對(duì)測(cè)量獲得的意義。因而FCM中的校準(zhǔn)具有雙重功能:儀器的準(zhǔn)直調(diào)整和定量標(biāo)度落實落細。標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)該穩(wěn)定,有形成份形狀應(yīng)是大小比較一致球形組成部分,樣品分散性能良好深入闡釋,且經(jīng)濟(jì)、容易獲得高效化。常用標(biāo)準(zhǔn)熒光微球作為非生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品大大提高,雞血紅細(xì)胞做為生物學(xué)標(biāo)準(zhǔn)樣品。微球用樹(shù)脂材料制作完成的事情,或標(biāo)有熒光素調整推進,或不標(biāo)記熒光素。所用的雞血紅細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)樣品制作過(guò)程昭下:取3.8%枸櫞酸或肝素抗凝的雞血(抗凝劑:雞血=1:4)研究成果,經(jīng)PBS清洗3次發展契機,再用5~10ml的1.0%戊二醛與清洗后的雞紅細(xì)胞混合,室溫下振蕩醛化24h機製性梗阻,后經(jīng)PBS再清洗齊全,貯4℃冰箱中備用。需要指出的是因?yàn)槲唇?jīng)熒光染色改造層面,所測(cè)光信號(hào)為雞血紅蛋白的自發(fā)熒光機製。
 
  儀器的操作和使用
 
  ①打開(kāi)電源大面積,對(duì)系統(tǒng)進(jìn)行預(yù)熱流動性;
 
  ②打開(kāi)氣體閾生產效率,調(diào)節(jié) 壓力反應能力,獲得適宜的液流速度;開(kāi)啟光源冷卻系統(tǒng)競爭激烈;
 
 ⊥度肓Χ?、墼跇悠饭苤屑尤肴ルx子水,沖洗液流的噴嘴系統(tǒng)學習;
 
 〖夹g、芾眯?zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)樣品,調(diào)整儀器改革創新,使在激光功率最新、光電倍增管電壓發揮重要作用、放大器電路增益調(diào)定的基礎(chǔ)上,0和90散射的熒光強(qiáng)度模樣,并要求變異系數(shù)為腥〉蔑@著成效。?br /> 
 祿@示、葸x定流速責任、測(cè)量細(xì)胞數(shù)、測(cè)量參數(shù)等實現,在同樣的工作條件下測(cè)量樣品和對(duì)照樣品持續向好;同時(shí)選擇計(jì)算機(jī)屏上數(shù)據(jù)的顯示方式,從而能直觀掌握測(cè)量進(jìn)程;
 
 〔蝗莺鲆?、迾悠窚y(cè)量完畢后,再用去離子水沖洗液流系統(tǒng)記得牢;
 
 〗M建、咭?yàn)閷?shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)已存入計(jì)算機(jī)硬盤(pán)(有的機(jī)器還備有光盤(pán)系統(tǒng),存貯量更大)的可能性,因此可關(guān)閉氣體、測(cè)量裝置不可缺少,而單獨(dú)使用計(jì)算機(jī)進(jìn)行數(shù)據(jù)處理系列;
 
  ⑧將所需結(jié)果打印出來(lái)服務為一體。
 
  操作和使用中的注意事項(xiàng)
 
  1)光電倍增管要求穩(wěn)定的工作條件方案,暴露的較強(qiáng)的光線(xiàn)下以后,需要較長(zhǎng)時(shí)間的“暗適應(yīng)”以消除或降低部分暗電流本底才能工作相互配合;另外還要注意磁屏蔽統籌發展;
 
  2)光源不得在短時(shí)間內(nèi)(一般要1h左右)關(guān)上又打開(kāi);使用光源必須預(yù)熱并注意冷卻系統(tǒng)工作是否正常積極回應;
 
  3)液流系統(tǒng)必需隨時(shí)保持液流暢通慢體驗,避免氣泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要經(jīng)過(guò)過(guò)濾全會精神、消毒製高點項目;
 
  4)注意根據(jù)測(cè)量對(duì)象的變換選用合適的濾片系統(tǒng)、放大器的類(lèi)型等的過程中;
 
  5)特別強(qiáng)調(diào)每次測(cè)量都需要對(duì)照組物聯與互聯。

 

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