1. 選擇表達載體時橫向協同,要根據(jù)所表達蛋白的最終應用考慮新的動力。如為方便純化重要意義,可選擇融合表達設計能力;如為獲得天然蛋白,可選擇非融合表達有望。
2. 融合表達時在選擇外源DNA同載體分子連接反應時進一步推進,對轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯過程中密碼結(jié)構(gòu)的閱讀不能發(fā)生干擾。
3. 菌液OD值要小于1方案,否則細胞太濃太老應用的選擇,不易破碎,且質(zhì)粒易丟失左右。
4. 誘導時間最好做一個梯度背景下,不同蛋白誘導時間需摸索。
5. 誘導溫度適當摸索:25可靠保障、30℃自然條件。
6. IPTG濃度:一般在1 mM 以內(nèi),可適當摸索開展。
7. 超聲條件可視實際情況改變互動互補,只要使菌體裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠意向。