1. 選擇表達(dá)載體時市場開拓,要根據(jù)所表達(dá)蛋白的最終應(yīng)用考慮激發創作。如為方便純化,可選擇融合表達(dá)促進進步;如為獲得天然蛋白技術先進,可選擇非融合表達(dá)特點。
2. 融合表達(dá)時在選擇外源DNA同載體分子連接反應(yīng)時顯著,對轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯過程中密碼結(jié)構(gòu)的閱讀不能發(fā)生干擾規劃。
3. 菌液OD值要小于1,否則細(xì)胞太濃太老進一步,不易破碎宣講手段,且質(zhì)粒易丟失。
4. 誘導(dǎo)時間最好做一個梯度統籌推進,不同蛋白誘導(dǎo)時間需摸索。
5. 誘導(dǎo)溫度適當(dāng)摸索:25進行培訓、30℃科普活動。
6. IPTG濃度:一般在1 mM 以內(nèi)凝聚力量,可適當(dāng)摸索。
7. 超聲條件可視實際情況改變逐漸完善,只要使菌體裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠。