細胞凋亡的檢測方法眾多有所提升，流式細胞儀檢測凋亡高端化，是常用的方法。由于流式細胞儀固有的特點――可以準確的進行凋亡細胞的計數設備製造。因此落到實處，具有其它方法*的*性效果。下面我們就簡單明了地介紹流式在檢測凋亡方面的應用。
在凋亡誘導劑的作用下營造一處，首先是細胞色素C和apa f-1形成復合體服務水平，線粒體的功能發(fā)生衰退;后是caspase家族激活，磷脂酰絲氨酸外翻保供，這時細胞的形態(tài)已經發(fā)生了改變哪些領域，可以看到細胞變小，胞核皺縮;zui后是細胞內DNA斷裂產品和服務，形成凋亡小體像一棵樹。
在凋亡發(fā)生的各個過程當中，都有相應的流式細胞儀的檢測方法不斷創新，可以采用以下檢測方法：
1高效利用、線粒體功能
2、DNA Cycle
3去突破、Caspases
4品質、Annexin V Assay
5、DNA Fragmentation Assays
基本上涵蓋了細胞凋亡的各個期，對各種檢測方法的原理和特點做一個簡單介紹能運用。
線粒體功能檢測的試劑盒有深圳達科為公司代理的試劑盒(產品編號為BVK250)和BD公司出售的盒Apo-Alert試劑盒。其檢測主要采用陽離子型熒光染料。原理是：正常細胞中講理論，染料可以在線粒體內聚集有望，發(fā)出明亮的紅色熒光;而細胞凋亡后，其線粒體膜電位發(fā)生改變解決問題，染料無法進入線粒體服務效率，只能在胞質中以單體形式存在，發(fā)出綠色的熒光最為突出≈鸩礁纳?？梢栽跓晒怙@微鏡下，或流式檢測。采用488nm激發(fā)落實落細，其檢測波長分別是527nm和590nm。整個實驗過程操作簡單組成部分，只需要30min就可以見到結果交流等。
Caspase家族可以檢測的分子非常多，也有不少商業(yè)的試劑盒可以應用發展目標奮鬥。即使沒有相應的試劑盒自動化裝置，只要有相應抗體基本上是可以檢測的，具體的方法是參照細胞內蛋白檢測的步驟規劃。
在細胞凋亡過程中伴隨著一系列的形態(tài)特征改變關規定，細胞膜的改變是這些特征中較早出現(xiàn)的一種。在凋亡細胞中應用前景，細胞膜磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的外側指導。Annexin-V是一種35-36 KD的鈣粒子依賴的磷脂結合蛋白，它對PS具有較高的親和力兩個角度入手。細胞凋亡時關註點，可以和外翻的PS結合，從而可以檢測凋亡的細胞進入當下。發(fā)生死亡的細胞其細胞膜上的PS也外翻建強保護，因而也會陽性。因此首次，常用的凋亡試劑盒除了采用Annexin-V標記之外流動性，還會加一種DNA染料，常用的有PI和7-AAD生產效率，由于死亡的細胞膜通透性增高反應能力，染料可以進入細胞內和DNA結合，從而可以發(fā)熒光競爭激烈，區(qū)分出死細胞投入力度。
下圖給出的是在使用FAS單抗誘導前后的檢測結果效果，橫坐標是Annexin-V FITC, 縱坐標是PI，左上技術、右上改善、左下、右下四個象限中右上象限代表死亡的細胞再獲，左下象限是存活的細胞穩定性，右下象限是凋亡的細胞最深厚的底氣。
在采用Annixin V方法檢測凋亡細胞時敢於挑戰，要特別強調一點：該方法適用于懸浮生長的細胞，如：淋巴細胞等細胞的檢測應用擴展。對于貼壁生長的細胞過程中，由于在胰酶等消化處理過程中會造成細胞膜的損傷，會造成較高的假陽性建立和完善，從而影響檢測結果特征更加明顯。盡管目前，包括國外也有一些單位采用該方法檢測貼壁生長的細胞啟用。我不推薦用該方法檢測。因為其重復性較差，且需要操作時非常小心活動上。
DNA周期檢測原本是用來反應細胞各個期達到，即細胞增殖狀況的。利用細胞內DNA能夠和熒光染料大型，如PI結合的特性的可能性。細胞各個時期由于其DNA含量不同從而結合的熒光染料不同，流式檢測的熒光輕度也不一樣不可缺少。G2-M期DNA含量是G0-G1的兩倍系列，而S期介于兩者之間。
但是由于發(fā)現(xiàn)凋亡的細胞DNA含量較少服務為一體，因而可以在細胞G0-G1期前面有一個亞二倍體峰方案，從而認為是凋亡細胞。但是由于死亡的細胞本身其DNA含量也是減少的相互配合，因而非常難于區(qū)分凋亡和死亡的細胞主要抓手。在90年代，該方法曾經風靡一時重要的角色，現(xiàn)在看來空間載體，那時的實驗結果需要推敲。盡管要落實好，經典的流式檢測資料給出的圖是認為凋亡的細胞是緊挨著G0-G1期峰的一個峰即將展開，死亡的細胞峰離G0-G1期峰較遠示範，但是這種典型的結果似乎很難獲得。有其它的替代方法提高，*可以不用這種方法發展基礎。
晚期凋亡的細胞由于DNA的斷裂，因而可以出現(xiàn)DNA ladder有很大提升空間，從而也就有了經典的檢測方法TUNEl要求。流式也能進行Tunel檢測，其檢測原理與經典Tunel原理基本一致認為。以BD公司的為例運行好，其利用TdT能將熒光素標記的dUTP標記到斷裂的DNA末端，從而使凋亡的細胞具有熒光紮實。但是由于在細胞內標記同期，細胞需要進行固定處理，操作類似免疫組織化學法可能性更大，容易造成假陽性鍛造。建議采用原裝大廠的試劑盒，并且嚴格的設立對照使命責任。經過預實驗方法穩(wěn)定后再進行大規(guī)模實驗共謀發展。標本處理后，均可以用熒光纖維鏡進行觀察持續創新，拍照創造。流式檢測后，可以進行的計算凋亡百分比性能。這一點，經典TUNEl是做不到的。