將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后順滑地配合，完成高溫變性完善好，低溫復(fù)性紮實做，適溫延伸的熱循環(huán)擴大，并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律配套設備，與模板DNA互補(bǔ)配對(duì)的Taqman探針被切斷勃勃生機，熒光素游離于反應(yīng)體系中意見征詢，在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光逐漸完善，隨著循環(huán)次數(shù)的增加各有優勢，被擴(kuò)增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長(zhǎng)技術發展，通過(guò)實(shí)時(shí)檢測(cè)與之對(duì)應(yīng)的隨擴(kuò)增而變化熒光信號(hào)強(qiáng)度，求得Ct值資料，同時(shí)利用數(shù)個(gè)已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對(duì)照自動化，即可得出待測(cè)標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。

　　Ct值（Cyclethreshold，循環(huán)閾值）的含義為：每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號(hào)到達(dá)設(shè)定閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)規模最大。

　　1. 熒光閾值（threshold）的設(shè)定

　　PCR反應(yīng)的前15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)作為熒光本底信號(hào)關註度，熒光閾值的缺省（默認(rèn)）設(shè)置是3-15個(gè)循環(huán)的熒光信號(hào)的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍重要手段，即：threshold= 10*SDcycle 3-15

　　2. Ct值與起始模板的關(guān)系

　　每個(gè)模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系穩中求進，公式如下。

　　Ct=-1/lg(1+Ex)*lgX0+lgN/lg(1+Ex)

　　n為擴(kuò)增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)不折不扣，X0為初始模板量再獲，Ex為擴(kuò)增效率，N為熒光擴(kuò)增信號(hào)達(dá)到閾值強(qiáng)度時(shí)擴(kuò)增產(chǎn)物的量最深厚的底氣。

　　起始拷貝數(shù)越多敢於挑戰，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)品可作出標(biāo)準(zhǔn)曲線應用擴展，其中橫坐標(biāo)代表起始拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)過程中，縱坐標(biāo)代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值創造更多，即可從標(biāo)準(zhǔn)曲線上計(jì)算出該樣品的起始拷貝數(shù)。